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Faire la mise au point
C'est obtenir une
image nette, en modifiant la distance objectif - préparation
microscopique.
Deux techniques sont
disponibles :
- modifier la position de l’objectif en
déplaçant l’ensemble du tube optique ;
- déplacer verticalement la platine
porte-objet ;
- pour le déplacement on dispose d’un mouvement
rapide et d’un mouvement lent destiné à parfaire la mise au point
grâce à une vis micrométrique munie d’un tambour gradué.
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1. Bouton de mise au
point rapide = MAP macrométrique.
2. Bouton de mise au point précise = MAP micrométrique
(chaque graduation correspond à un déplacement vertical de 1
µm).
3. Système de blocage de la MAP afin d’éviter
de trop se rapprocher de la préparation et d’endommager
l’objectif. |
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1. Faire la mise au
point (MAP) au faible grossissement :
- Choisir un faible
grossissement : oculaire x10 et objectif x10 = G x100.
- Centrer la
préparation sur la platine.
- Amener la lentille frontale de l'objectif le plus près possible de
la lamelle, sans la toucher (selon le microscope utilisé, il faut
descendre le tube optique ou remonter la platine).
- Regarder dans
l’oculaire et éloigner tout doucement l'objectif de la lamelle en
faisant tourner la molette de déplacement rapide.
- Au bout de
quelques instants l’image nette apparaît
- Corriger éventuellement
la position de la préparation afin de placer au centre du champ
optique une partie significative de l’image.
- Régler éventuellement
le diaphragme d'ouverture pour améliorer la qualité de
l’observation.
- A ce grossissement l'utilisation de la MAP
micrométrique est inutile.
2. Faire la MAP au
moyen grossissement : oculaire x10 et objectif x40 = G x400
La
MAP étant préalablement réalisée au faible grossissement, remplacer
l’objectif x10 par l’objectif x40 ; les objectifs sont réglés pour
ne pas avoir à retoucher de façon importante la MAP lors d'un
changement d'objectif ; ouvrir le diaphragme à l'ON du nouvel
objectif. En principe l’image est nette ou ne nécessite que de
petites modifications de MAP en faisant tourner la molette de
déplacement lent (vis micrométrique). Régler le diaphragme pour
améliorer la qualité de l’observation.
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la fermeture du diaphragme augmente la zone de netteté mais diminue
la définition de l’image et la luminosité ; pour explorer les
différents niveaux de l’objet à observer, il est conseillé de ne pas
trop diaphragmer mais de modifier la MAP pour passer par les divers
niveaux intéressants de la préparation.
3. Faire la MAP au
fort grossissement : oculaire x10 obj. x100 immersion = G
x1000
- Si vous
n'avez pas l'habitude de travailler à l'immersion, il est préférable
de faire d'abord la MAP au moyen grossissement
- Sans
modifier la MAP, dégager l'objectif x40 de la préparation.
- Mettre une petite goutte d'huile à immersion sur la
lamelle.
- Amener l'objectif à immersion sur la lamelle (un crantage
permet de se rendre compte que la position d'alignement est
correcte).
- Observer.
- Il est souvent nécessaire de retoucher la MAP
avec la molette de déplacement micrométrique et de fermer légèrement
le diaphragme pour améliorer la qualité de l'image.
- Avec un peu de
pratique ces gestes deviennent rapides et précis.
Faire attention à ne pas mettre les objectifs à sec dans l'huile.
Quand la préparation est observée à l'immersion, il n'est plus
possible de passer aux grossissements plus faibles.
L'objectif x100 possède généralement
une monture télescopique qui évite d'abîmer la lentille frontale
lorsqu'elle touche la lamelle lors d'une erreur de manipulation.
Après l'observation, dégager l'objectif à immersion et ; essuyer
rapidement avec un mouchoir en papier la lamelle et l’objectif pour
éviter de mettre de l’huile sur une nouvelle préparation ou de
contaminer les objectifs à sec. En fin de séance l’objectif à
immersion sera essuyé plus correctement.
Remarque : certaines huiles contiennent des produits dangereux, il
est fortement déconseillé d’essuyer l’objectif ou les lamelles avec
le gras du doigt. Vérifier bien que vous utilisez une huile
dépourvue de biphényls polychlorés toxiques qui sont absorbés par la
peau.
4. Mise au point avec les
objectifs planapochromatiques à grande ouverture numérique et ne
fonctionnant pas en immersion (objectifs à sec) :
La qualité de l'image donnée par les objectifs à sec
ayant une grande ouverture numérique (ex une ON supérieure à 0,70
pour un objectif apo x40) dépend de l'épaisseur de la lamelle. Ces
objectifs doivent donc posséder un dispositif qui déplace certaines
lentilles pour permettre l’ajustement à l’épaisseur de la lamelle.
En théorie
cette épaisseur est de 17 µm mais dans la pratique elle est souvent
différente. Il suffit de mesurer la pile de lamelles dans une boîte
neuve de 100 lamelles pour constater qu’elle est rarement égale à 17
mm
Cet ajustement est indispensable pour faire
fonctionner l’optique au maximum de ses possibilités.
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Objectif
planapochromatique 40 ayant une ouverture numérique de 0,95.
Une bague permet l'ajustement à l'épaisseur de la lamelle
(exemple : 17 si la pile de 100 lamelle mesure 17 mm). |
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