L'utilisation du microscope optique
en mycologie et lichénologie
Les produits chimiques utiles en microscopie
par Jean-Pierre GAVERIAUX

 

Les produits chimiques indispensables à la microscopie peuvent être obtenus lors des séances de travaux pratiques à la Faculté de Pharmacie ou sur le terrain, lors des sorties mycologiques de la SMNF. Me contacter préalablement (mail/courrier) pour connaître la liste des produits disponibles.


Si l'étude macroscopique des champignons permet à certains mycologues d'identifier quelques centaines d'espèces, il faut, dans la plupart des cas, utiliser le microscope afin d'obtenir les renseignements nécessaires pour progresser dans les clés de détermination. L'observation et la mesure des cellules et structures fongiques, à différents grossissements, sont indispensables pour obtenir les informations susceptibles de nous orienter vers une détermination plus fiable. 

Exemple : à l'œil nu nous pouvons apprécier la couleur des spores (ou plus généralement de la sporée) mais l'observation au microscope sera très enrichissante en nous donnant des précisions sur la forme (sphérique, ovoïde, fusiforme, aciculaire...), la septation (nombre, disposition et épaisseur des cloisons), l'ornementation (réticules, pointes, tubercules, verrues, ailes...), la guttulation (présence de petites gouttelettes de graisse dans le cytoplasme), l'existence et position d'un pore germinatif, sans oublier les dimensions évaluées à l’aide d'un micromètre oculaire. 

Si certaines de ces observations peuvent se faire dans l’eau, il est clair que de nombreuses structures ne seront décelées qu’en présence de produits chimiques judicieusement sélectionnés. Ces différents milieux d’observation, colorants, réactifs microchimiques, milieux de montage… seront conservés dans des petits flacons compte-gouttes en verre fumé, au sec, à l’abri de la lumière et de la chaleur.

Rappel : le fragment de champignon à étudier au microscope est toujours placé entre deux lames de verre. Celle du dessous, la plus grande, de dimensions 26x72 mm, ayant une épaisseur d'environ 1mm, porte le fragment à étudier dans un liquide de montage ; on l'appelle porte-objet ou plus simplement lame. Celle du dessus, en verre très mince, en général de 0,17mm d'épaisseur, couvre  le fragment à étudier, c'est le couvre-objet ou lamelle. On utilise généralement des lamelles carrées de 18x18 ou 20x20 mm. Lorsque la préparation microscopique est terminée, on dit que l'objet est monté entre lame et lamelle.

Les différentes techniques de prélèvement des fragments à observer seront détaillées dans un prochain article. Dans tous les cas, le fragment est placé sur une lame dans un milieu liquide choisi en fonction de la nature du fragment, de la structure à observer et de la destination de la préparation. Pour savoir si une spore est ronde ou ovale, un montage dans l'eau suffit mais la confection d'une préparation que l'on désire conserver pour prendre des photographies est beaucoup plus laborieuse et nécessite l'utilisation de plusieurs de ces milieux.

La préparation des produits nécessite un minimum d'ustensiles : béchers en pyrex (1), éprouvettes graduées (2), erlenmeyers en pyrex (3), entonnoir (4), verres de montre (5) pour peser les produits, agitateur, papier filtre, pipettes graduées de précision, réchaud électrique avec thermostat et surtout une balance de précision (j'utilise une mini-balance électronique précise au 1/20 de gramme).

Il est difficile de présenter une classification de ces milieux, les associations complémentaires étant nombreuses, on peut toutefois schématiquement (et arbitrairement) répertorier environ une dizaine de milieux différents.

01. Les milieux d'observation
02. Les milieux de réhydratation et de ramollissement
03. Les milieux de dissociation
04. Les fixateurs et milieux d'inclusion
05. Les deux colorants indispensables
06. Les colorants occasionnels
07. Les réactifs de Lugol et Melzer
08. Quelques colorants - réactifs spécifiques
09. La coloration vitale
10. Les milieux de conservation (montage permanent)
11. L’huile à immersion


Trois produits (rouge Congo, réactif iodé, bleu coton) et
un flacon d'huile à immersion suffisent pour débuter ;
il faudra ensuite compléter en fonction des groupes que l'on désire étudier.

     

Ammoniaque

action regonflante et légèrement dissociante

Baume du Canada

milieu de conservation (matériel anhydre)

Bleu coton lactique

colorant universel (contenu des cellules et ornementations sporales)

Bleu coton au lactophénol

colorant universel - milieu de conservation

Bleu de crésyl

métachromasie - spores - laticifères - dermatocystides - poils - incrustations

Bleu de toluidine

coloration des hyphes végétatives

Bouin (picroformol)

fixateur

Carmin acéto-ferrique

granulations carminophiles (ou sidérophiles) des basides des Lyophyllées

Chloral hydraté

milieu d’observation (indice de réfraction de 1,510)

Chloral - Lactophénol

excellent milieu d’observation (indice de réfraction de 1,49)

Eau

milieu de montage

Fuchsine phéniquée de Ziehl

incrustations acido-résistantes de certaines hyphes du revêtement piléique

Giemsa (réactif de)

coloration des noyaux

Histolaque

milieu de synthèse pour montage et conservation en phase aqueuse

Hollande (picroformol cuprique)

fixateur

Hoyer (Liquide de)

milieu de conservation (en phase aqueuse)

Lactophénol

milieu d’observation (indice de réfraction de 1,44)

Lugol

colorant universel - asques - tholus - spores - amyloïdité - dextrinoïdité

Melzer (Réactif de)

colorant universel, ornementations et cloisons des spores.

Phloxine B

colorant cytoplasmique des cellules mortes

Potasse (KOH)

observation - dissociation - regonflant - éclaircissement des préparations

PVA lactophénolé

milieu de conservation (en milieu aqueux)

Rouge Congo ammoniacal

colorant universel (exsiccata)

Rouge Congo SDS

colorant universel (matériel frais)

Rouge neutre

coloration vitale des vacuoles

Soudan III lactophénolé

guttules (inclusions lipidiques des spores)

Sulfo-réactifs

cystides et laticifères de Russulaceae

Tableau récapitulatif simplifié des principaux produits utilisés en microscopie et leurs rôles

     

Les flacons et le petit matériel indispensable à la microscopie
seront rangés dans une boîte facile à nettoyer et à transporter

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